Comment Regenerer une colonne HPLC?

Rincer pour 4 volumes de colonne avec 50/50 Ethanol/eau puis par 100\% d’eau (ne pas utiliser d’alcool à chaine longue). Retourner la colonne, rincer avec 0.2M de NaOH à 90°C et à 0.5 ml/min pendant 2 heures, puis retourner la colonne, réguler en température et rcoquilibrer sous solvant initial.

Comment injecter en HPLC?

En HPLC, que l’injection soit manuelle ou automatique, l’injection se fait avec une boucle d’injection qui doit être remplie puis sera injectée dans le système. Le volume de la boucle d’injection joue un rôle majeur dans le volume d’échantillon injecté. De manière générale les boucles d’injection vont de 1 à 100 µL.

Comment fonctionne un HPLC?

Il faut ajuster la force éluante en fonction des solutés à séparer. Pour cela, on peut utiliser un solvant pur ou un mélange de solvants : on dit travailler en mode isocratique. Dans certains cas il est utile de faire varier la force éluante au cours de l’analyse.

Quel est le temps de rétention?

Le temps de rétention (tr) Le temps de rétention est le temps nécessaire à un composé pour éluer de la colonne et être détecté. Conventionnellement, le temps de rétention est déterminé au sommet du pic chromatographique qui correspond généralement à la moitié de l’élution du composé.

Quelle est la grandeur de rétention de la colonne?

C’est la principale grandeur de rétention. Il varie en fonction du débit, de la température d’élution, de la composition de la phase mobile et du vieillissement de la colonne. C’est le ;temps que met un soluté non retenu (l’air par exemple dans le cas de la CPG) à sortir de la colonne.

Quel est le facteur de rétention du composé?

Il correspond au temps de séjour du composé en contact avec la phase stationnaire. Le facteur de rétention caractérise la rétention d’un composé. C’est un paramètre important indépendant du débit (Attention à ne pas confondre avec le coefficient de distribution K!) Pour des valeurs de R supérieures à 1,5, les pics sont correctement séparés.

Quel est le volume de rétention d’un soluté?

Volume de rétention. Au temps de rétention t R d’un soluté correspond un volume de rétention V R qui correspond au volume de phase mobile nécessaire à l’élution. V R = t R x D. Avec D le débit du gaz vecteur. Temps de rétention réduit. On ne prend plus comme origine l’injection mais le pic du temps mort.